Резюме
В статье приведены материалы по использованию современных методов бактериологической диагностики листериозов. Установлена циркуляция листерий в г. Алматы и изучены их свойства.
Summary
In the article the information on the use of modern methods of bacteriological diagnosis listeriosis. Identified the circulation of Listeria in Almaty and studied its properties.
Ключевые слова: идентификация, селективность, тест, биосубстраты.
Keywords: identification, selectivity, test, biosubstrate.
Большой полиморфизм клинических проявлений листериозов, особенно в случае спорадических заболеваний, чрезвычайно затрудняет диагностику, в результате чего бактериологические лабораторные исследования приобретают решающую роль. Микробиологическая диагностика листериозов осуществлялась в Городской централизованной бактериологической лаборатории г. Алматы в течение последних 5 лет. До последнего времени для выделения листерий из различных биоматериалов использовались общепринятые методы, разработанные в РГКП «Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций им. М. Айкимбаева» в 1997, 2000 гг. [1]. Бактериологическая диагностика включала микроскопическое исследование исходного материала и посев на питательные среды для высева возбудителя. Для выделения листерий из стерильного материала использовали обычные среды с высокой питательностью (агар Хоттингера) с добавлением 1% глюкозы и 3% глицерина. Посев нестерильного материала (кал, отделяемое зева и др.) производили в эти же среды с добавлением антибиотика. Чувствительность указанных методов была сравнительно невысока, а высеваемость культур из биосубстратов пациентов в эти годы была низкой и исчислялась единичными случаями.
В 2013-2014 гг. в работу лаборатории был внедрен ряд инновационных технологий, в том числе и для диагностики зоонозов, в частности листериозов, а именно:
— для селективного обогащения листерий на жидкой среде Palcam;
— для специфического выделения на агаровой среде Palcam;
— для повышения эффективности идентификации листерий внедрены новые тесты: тест с лецитиназой, температурный тест (220С,370С) и др.
Новый метод выделения листерий заключался в применении селективных сред обогащения и выделения возбудителя из исследуемого материала. В среды введены специфические ингредиенты для подавления сопутствующей микрофлоры, присутствующей обычно в материале, забранном из нестерильных полостей и участков тела человека. Частота выделения клинически значимых видов Listeria spp с использованием селективного этапа обогащения и селективных сред выделения значительно увеличивается. Селективные среды обогащения и выделения культур клинически значимых видов Listeria spp приведены в таблице 1.
В работе использовалась продукция компании HiMedia Laboratories Limited (Индия). Она отличалась высокой специфичностью и готовилась по системе GNP [2].
В настоящей работе нами были проанализированы результаты лабораторного исследования пациентов на листериоз за 2012, 2013, 2014 гг., т.е. до и после внедрения новых методов. Бактериологическому исследованию был подвергнут материал от пациентов городской инфекционной больницы им. И. Жекеновой г. Алматы.
Биосубстраты от пациентов доставлялись в лабораторию в течение 2-х часов при температуре 35-370С в одноразовых стерильных пробирках или контейнерах с герметически завинчивающимися крышками, фекалии – в течение 48 часов, при условии доставки в транспортной среде или среде обогащения Palcam.
Схема исследования на листериоз также не отличалась от исследования на другие инфекционные заболевания. В день забора засевали жидкие обогатительные среды, их инкубировали в течение 24-72 часов при температуре 300С с ежедневным высевом на плотную агаровую среду Palcam. С агаровой среды при наличии роста (черные колонии с ореолом) делали мазки по Граму. В мазках агаровых культур листерии часто выглядели как грамположительные кокки и коккобациллы, с бульона – как короткие палочковидные бактерии. После проведения морфологической идентификации проводили изучение биохимических свойств выделенной культур.
Как видно из таблицы 2, в 2012 году листерии не выделялись, а в 2013 и 2014 гг. высевались как из крови, так и из других биосубстратов – кала, мочи, зева. «Выявляемость» возбудителей составила около 8%, а «бактериологическая подтверждаемость» случаев заболевания 47,6-50,3%. Показатели «выявляемость» и «бактериологическая подтверждаемость» вычислены в соответствии с [3]. «Выявляемость» была определена, как отношение числа лиц с бактериологически подтвержденным диагнозом к количеству лиц обследованных; «бактериологическая подтверждаемость», как отношение числа лиц с бактериологическим диагнозом к числу лиц с клиническим подтверждением диагноза. Оба показателя выражены в процентах.
Для изучения видового состава выделенных возбудителей были использованы дифференциальные тесты: расщепление маннита, глюкозы, L (+) рамнозы, Д (+) ксилозы, OF-тест на среде Хью-Лейфсона, температурные тесты при 370 С и 220 С, определение лецитиназной активности, подвижность при комнатной температуре, определение оксидазной и каталазной активности и гемолиза [4].
Был определен видовой спектр выделенных культур: Listeria monocytogenes, Listeria grai, Listeria denitrificans. Наиболее часто из патологического материала выделялась Listeria monocytogenes. Из 42 выделенных культур на ее долю приходилось 42%, Listeria grai (36%), Listeria denitrificans (22%).
Морфология клеток Listeria spp в мазках, приготовленных из культур листерий и окрашенных по Граму, в значительной степени зависела от условий культивирования. В мазках бульонных культур наблюдались короткие грамположительные палочки, похожие на коринебактерии, в мазках из агаровых сред определялись кокки и коккобациллы. Поэтому клетки Listeria spp в окрашенных мазках приходится дифференцировать с клетками стрептококков, коринебактериий и др.
Выводы
1. Установлена циркуляция возбудителей листериозов в г. Алматы.
2. Выявлена более высокая эффективность селективного выделения листерий на средах Palcam по сравнению с общепринятым методом, разработанным РГКП «Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций им. М. Айкимбаева».
3. Показана ценность бактериологического метода для диагностики листериозов (бактериологическая подтверждаемость (более 40%).
4. Изучены морфологические и биохимические свойства выделенных микроорганизмов.
5. Установлен видовой спектр листерий, выделенных из различных биосубстратов пациентов.
Литература:
1. Руководство по листериозу. (Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лечение, лабораторная диагностика) Алматы,1995, с. 3-53. МЗ РК.
2. Листериоз. Методические рекомендации. Правительство Москвы. Комитет здравоохранения. Москва, 2001 с. 1-11.
3. Розенфельд Б.Ф. Общие итоги анализа динамики и структуры ресурсного потенциала социальной сферы. Москва, 1995г.
4. Краткий определитель бактерий Берги, пер. с анг., Москва 1990, с. 300-310.
5. Егоров А.К. Листериоз, Частная эпидемиология. Ленинград,1974,с. 123-134.
Отправить рукопись