+7 (727) 250 00 11
+7 (776) 250 05 58

ISSN 2225-806X

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ВЫЯВЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА К ПРЕПАРАТАМ ПЕРВОГО РЯДА НА ЖИДКИХ И ТВЕРДЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ

Автор: Аленова А.Х*, Бисмилда В.Л., Игликова Ш.К., Чингисова Л.Т.
Место работы: НЦПТ МЗРК, г.Алматы, Казахстан

Аннотация

Проведен сравнительный анализ результатов бактериологического определения резистентности микобактерий туберкулеза к препаратам первого ряда двумя методами: на BACTECMGIT960 и на среде Левенштейна-Йенсена у 478 больных туберкулезом легких, находившихся на стационарном лечении в НЦПТ МЗРК в 2009-2011 гг.

Установлено, что средний срок детекции МБТ на твердой среде составил 26,4±5,8 дней, а на жидкой: 8,7±1,9 (p<0,001); то есть выявляемость МБТ этим методом была в 1,2 раза выше. Применение системы BACTECMGIT 960 для определения ТЛЧ к противотуберкулезным препаратам первого ряда по сравнению с аналогичными исследованиями на среде Левенштейна-Йенсена в 2,5 раза сократило сроки получения результатов (22,1±1,3 дней против 54,8±5,8).

Ключевые слова: туберкулез, микобактерии, резистентность

1. Актуальность

В настоящее время, серьезную альтернативу классическим методам выявления МБТ и определения чувствительности на плотных средах представляет автоматизированный бульонный метод BACTEC MGIT 960 AST (ВОЗ, 2002). Определение микобактерий туберкулеза и их лекарственной устойчивости с его помощью представляет собой автоматизированный вариант метода пропорций и позволяет значительно сократить сроки исследований — до 21 дня. Согласно этой методике, размножающаяся микробная популяция активно поглощает кислород, высвобождая флюоресцентный компонент, который начинает светиться при ультрафиолетовом излучении. Эта новая технология позволяет проводить постоянный мониторинг уровня флюоресценции, который зависит от выраженности бактериального роста. Результаты роста культуры и определения чувствительности учитываются автоматически и выдаются в распечатке.

Между тем, из-за незначительных сроков использования данных методов в практическом здравоохранении, лишь в отдельных исследованиях проводился мониторинг совпадения результатов использования классических и автоматизированных методов определения лекарственной устойчивости МБТ, что и определило цель настоящего исследования: изучение сравнительной чувствительности методов определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам первого ряда на жидких и плотных питательных средах.

2. Дизайн исследования

Обсервационное одномоментное исследование, основанное на проспективных и ретроспективных наблюдениях.

Исследуемая популяция – культуры лекарственно-устойчивых микобактерий туберкулеза, выделенные от больных с новым случаем туберкулеза легких, рецидивами и хроническими формами заболеваниям, также все случаи посевов на жидкие и твердые питательные среды и определение на них ТЛЧ к препаратам первого ряда за 2009-2011 г.

3. Материалы и методы   

В ходе проведения работы было обследовано 478 больных туберкулезом легких, находившихся на стационарном лечении в НЦПТ в 2009-2011 гг. Диагноз у всех больных был подтвержден с помощью бактериологических методов исследования. Среди обследованных число впервые выявленных больных составило 276 (57,9%), тогда как больных с рецидивами было 125 (26,2%), а с хроническими формами заболевания – 76 (15,9%). Основные клинико-эпидемиологические данные (возраст, пол, место жительства) получали из историй болезни пациентов. Исследование было одобрено этическим комитетом НЦПТ.

Образцы мокроты обрабатывали согласно рекомендациям для посева на жидкие питательные среды. Мокроту деконтаминировали с помощью NALC-NaOH, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин., после чего супернатант удаляли, а осадок ресуспендировали в 1-1,5 мл фосфатного буфера. Полученную взвесь использовали для приготовления мазка с окрашиванием по Цилю-Нильсену, посева на жидкие питательные смеси и среду Левенштейна-Йенсена. Культуры МБТ выращивали на жидких средах в системе BACTEC MGIT 960 с определением ТЛЧ к препаратам 1 ряда согласно рекомендациям производителей. Лекарственную устойчивость МБТ к препаратам 1 ряда на твердой питательной среде определяли  методом абсолютных концентраций.

Весь объем лабораторной диагностики проводился врачами и лаборантами референс-бактериологической лаборатории НЦПТ, прошедшими необходимую профессиональную подготовку.

Учитывая то, что при посеве на любые среды встречаются случаи проростов, вынуждающие к пересевам патологического материала (при посеве на плотную среду допустимое число проростов 3%, а при посеве на жидкую среду – 8-9%), нами проанализированы только те случаи посевов, при которых проростов не отмечалось. Полученные результаты вводились в базу данных, которая подвергалась статистической обработке с использованием программы Microsoft Excel. Полученные данные обрабатывались с использованием методов описательной статистики в программе Microsoft Excel с вычислением средних величин и оценке достоверности полученных различий. Различия считали достоверными при p<0,05.

4. Этическое участие

Сбор данных для исследования имеет характер конфиденциальности — такие как — закрытые и опечатанные двери, доступные только для личностей, вовлеченных непосредственно в этот проект. Проведение исследования было одобрено этическим комитетом НЦПТМЗ РК.

5. Результаты исследования

Был проведен сравнительный анализ результатов бактериологического исследования (BACTEC MGIT-960 и Левенштейна-Йенсена) мокроты больных, находившихся на стационарном лечении в НЦПТ МЗ РК. Из-за высокой стоимости реактивов для системы BACTEC MGIT-960 параллельное выявление МБТ классическим и ускоренным методами делали не у всех больных, приходилось избирательно включать в исследование только тех больных, которым МБТ в мокроте определяли двумя методами.

Сплошная выборка показала, что для исследования можно было воспользоваться постановкой тестов только у 478 больных.

Таблица 1 

Сравнительный анализ выявляемости МБТ на различных питательных средах

Число обследованных больныхСреда Левенштейна-Йенсена(плотная) (I)Средний срок роста МБТ(дни)BACTECMGIT 960(жидкая среда)Среднийсрок роста МБТ(дни)(II)Р I,II
из них МБТ+из них МБТ+
абс.%абс.%
47827256,926,4±5,833369,68,7±1,9<0,001

Статистическая обработка данных показала, что по частоте получения положительных результатов посевов в двух сравниваемых методах была обнаружена существенная разница, высоко достоверная разница установлена в сроках детекции МБТ на плотной среде Левенштейна-Йенсена (средний срок детекции составил 26,4±5,8 дней) и на жидкой среде (средний срок детекции составил всего 8,7±1,9 дней) (p<0,001). То есть, выявляемость микобактерий на жидкой среде была в 1,2 раза выше, чем на плотной среде, при этом отмечалось достоверное сокращение сроков исследований (в среднем на 17,7 дней, табл. №1)

На следующем этапе нашей работы мы изучили частоту совпадения результатов определения ТЛЧ на плотных и жидких средах, результаты которых представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты постановки теста на лекарственную чувствительность

к препаратам первого ряда на жидких и  плотных питательных средах

ПрепаратыЖидкая средаПлотная среда%совпаденияР
Кол-во иссл. культурУстойчивость.Кол-во иссл. культурУстойчивость
Стрептомицин47847098,3%47846497,1%98,7>0,05
Изониазид47817536,6%47817536,6%100,0>0,05
Этамбутол47815532,5%47815031,3%96,2>0,05
Рифампицин47820843,6%47820843,6%100,0>0,05

Согласно данным таблицы №2 самый низкий процент устойчивости из исследуемых препаратов первого ряда определялся у этамбутола: на жидкой среде устойчивость была выявлена в 155 исследованиях (32,5%), а на плотной среде — в 150 (31,3%). По остальным препаратам результаты устойчивости были одинаково высокие как на плотных, так и на жидких средах. При этом процент совпадений устойчивости на разных средах колебался от 96,2% до 98,7%. Так, для этамбутола совпадение результатов ТЛЧ составляло 96,2%, для стрептомицина – 98,7%, а для изониазида и рифампицина – по 100%. При статистической обработке в сравниваемых методах существенной разницы выявлено не было (p>0,05), что дало основание считать полученные результаты определения лекарственной устойчивости к препаратам первого ряда на плотных и жидких питательных средах сопоставимыми.

Кроме того, применение системы BACTEC MGIT 960 для определения ТЛЧ к противотуберкулезным препаратам первого ряда по сравнению с аналогичными исследованиями на среде Левенштейна-Йенсена в 2,5 раза сократило сроки получения результатов (22,1±1,3 дней против 54,8±5,8 дней)

Таким образом, данное исследование показало, что тесты на лекарственную чувствительность на плотной среде по чувствительности не отличаются от таковых по определению устойчивости МБТ, полученными на жидких средах при сопоставимых результатах частоты получения положительных посевов; а по срокам получения данных ТЛЧ система BACTEC MGIT 960 позволяет в 2,5 раза быстрее, чем на среде Левенштейна-Йенсена получить результат резистентности.

6. Выводы:

1. Применение системы BACTEC MGIT 960 для определения ТЛЧ к противотуберкулезным препаратам первого ряда по сравнению с аналогичными исследованиями на среде Левенштейна-Йенсена в 2,5 раза сократило сроки получения результатов (22,1±1,3 дней против 54,8±5,8).

2. При определении лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к препаратам первого ряда на жидких и плотных средах не было выявлено достоверной разницы (p>0,05) в сравниваемых результатах.

3. Процент совпадения ТЛЧ на жидкой и твердой питательных средах составляет для изониазида и рифампицина 100%, а для стрептомицина и этамбутола 98,7% и 96,2% соответственно.

Литература:

  1. ВОЗ. План расширения программы для борьбы с туберкулезом в Европейском регионе ВОЗ, 2002-2006 гг. — Женева, 2002,  32С.