+7 (727) 250 00 11
+7 (776) 250 05 58

ISSN 2225-806X

Современные технологии в клинической микробиологии

Автор: К. И. Билялова, Ж. С. Темирбаева, А. Ж. Аринова
Место работы: Научный центр педиатрии и детской хирургии Министерства здравоохранения и социального развития Республики Казахстан, Алматы (Казахстан)


Резюме
Приведены результаты по исследованию этиологической структуры различных биотопов с применением современной технологии (микробиологический анализатор WalkAway 40 (США), представлены данные по антибиотикорезистентности грамположительных и грамотрицательных бактерий с использованием программы WHONET. Установлен микробиологический спектр представителей различных микроорганизмов. Определены ведущие антибактериальные препараты в лечении нозокомиальных инфекций.

SUMMARY
The results of the study on the etiological structure of different habitats using modern technology (microbiological analyzer WalkAway 40 (US), presents data on the antimicrobial resistance of gram-positive and gram-negative bacteria using the program WHONET. Installed microbiological spectrum of representatives of various microorganisms. Determine the guide antibacterial drugs in the treatment of nosocomial infections.

Ключевые слова: этиологическая структура, микроорганизмы, нозокомиальные инфекции, антибиотикорезистентность.
Keywords: etiological structure, micro-organisms, nosocomial infections, antibiotic resistance

За последнее время диапазон микроорганизмов, вызывающих внутрибольничные инфекции значительно изменился [1-3]. В настоящее время среди возбудителей тяжелых инфекций в отделениях реанимации и интенсивной терапии преобладают грамположительные микроорганизмы. В начале 80-х годов прошлого века в этиологии инфекций на их долю приходилось около 40% случаев заболеваний, спустя 10 лет — свыше 50%. Изменение структуры актуальных возбудителей тяжелых инфекций, безусловно, связано с применением антибактериальных средств, активных в отношении как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий с формированием устойчивых штаммов и их распространенности. Несмотря на изменения в составе возбудителей внутрибольничных инфекций, лаборатория должна быть в состоянии идентифицировать большую часть микроорганизмов, вызывающих вспышки эндемических внутрибольничных инфекций. Длительность процесса верификации возбудителя, отсутствие лабораторий во многих стационарах, ведет к загруженности централизованных лабораторий и удлинению сроков выдачи результатов. 

В настоящее время в республике нет собственных производителей бактериальных диагностикумов. Препараты, ввозимые извне, не сертифицированы, отсутствуют антибактериальные диски на используемые в стране препараты. Все вышеуказанное снижает качество и уровень микробиологических исследований. При тестировании антибактериальных препаратов необходимо придерживаться установленных ВОЗ правил. Основным из них является включение в тестирование препаратов из различных групп согласно чувствительности к ним возбудителей. Для получения адекватных результатов необходима постановка тестов на чувствительность в одной чашке только на шесть препаратов. Важная роль лаборатории заключается в точной идентификации микроорганизма с установлением его родового и видового наименования с определением антибиотикорезистентности [4]. В каждом конкретном стационаре структура нозокомиальных инфекций зависит от профиля стационара, политики применения антибактериальных препаратов, контингента пациентов [5].
Таким образом, целью данного исследования явилась: оптимизация исследования этиологического спектра различных клинических материалов с использованием современной программы мониторинга антибиотикорезистентности WHONET.

Материал и методы
В данной работе представлен материал по обследованию различных локусов детей. Посев и идентификация проводилась на соответствующих дифференциально-диагностических средах по общепринятой методике. Распределение внутрибольничных штаммов и определение антибиотикорезистентности изолированных микроорганизмов осуществлялось компьютерной программой WHONET. С целью ускорения процессов идентификации до родового и видового состава выделенных микроорганизмов, а также определения антибиотикорезистентности в работе использовался микробиологический анализатор «WalkAway 40», США.

Современные технологии  в клинической микробиологии

Современные технологии  в клинической микробиологии

Результаты
Анализ полученных данных показал, что микробный пейзаж различных локусов детей представлен многообразием условно-патогенных микроорганизмов. В настоящее время установлена роль многих из них в развитии различных патологий у человека.
Среди изолированных микроорганизмов большую часть составили грамположительные микроорганизмы (диаграмма 1). Из них доля стрептококков группы В составила 90,5 % , незначительный процент по высеваемости заняли стрептококки гр А, гр Д , гр С и пневмококки — соответственно 5,3%, 2,3%, 1,1% и 0,8% (диаграмма 2).
Что же касается энтерококков, то нами установлен процент выделения Str. faecalis 80%, Str. faecium 20% (диаграмма 3).
Известен факт наличия у стрептококков природной устойчивости ко многим антибиотикам, широко используемым в стационарах. По данным различных стран БГСА являются не самыми частыми возбудителями внутрибольничных инфекций, однако могут быть причиной продолжительных и трудно поддающихся контролю вспышек. Являются возбудителями инфекций родильниц и новорожденных, характеризующихся тяжестью клинического течения, высокой летальностью, трудностью диагностики.

Наиболее выделяемым видом по частоте из общего числа стафилококков (диаграмма 4.) у детей оказался S.haemolyticus — 43,5%. Вторым по частоте определен коагулазоотрицательный стафилококк S.epidermidis — 34,7%, обладающий выраженной устойчивостью к антибиотикам, способностью удерживаться и размножаться на сосудистых катетерах и других медицинских устройствах. Один из ведущих возбудителей ВБИ — S. aureus изолирован у детей в 18,9%. Незначительный процент среди выделенных стафилококков заняли S. intermedius, S.saprophyticus, S.hominis- hominis и прочие виды (соответственно 1,8%, 0,7%, 0,2%). В контроле обсемененности различными видами стафилококков важную роль играет эффективная система эпидемиологического наблюдения, позволяющая установить появление метициллинрезистентных стафилококков (MRSA) в стационаре, с которыми связывают вспышки внутрибольничных инфекций.

Наряду с грамположительными микроорганизмами от больных детей нами изолированы грамотрицательные бактерии (диаграмма 5).
В одинаковом соотношении выделены E.coli и Klebsiella spp. (15,5%). Klebsiella pneumonia составили 46,4 %. В 18,9% определены Enterobacter spp. Бактерии рода Serattia обнаружены в 1,8%, Citrobacter sppв 1,0%, Cedecae в 0,8% и бактерии рода Proteus spp. в 0,5%. Энтеробактерии занимают второе место после грамположительных бактерий возбудителей внутрибольничных бактериемий у взрослых. У новорожденных бактериемии также вызываются грамотрицательными бактериями. Около 50% возбудителей инфекций мочевыводящих путей относятся к энтеробактериям. Энтеробактерии могут контаминировать медицинские инструменты и растворы, используемые до, после и во время хирургического вмешательства и явиться факторами передачи инфекций в стационаре.
Остальные представители условно-патогенных бактерий (диаграмма 6.) из различных локусов детей нами выделены в следующем виде: 46,0% Ps.aeruginosae, в 39,6% H.influenzae, в 7% Acinetobacter, в 4,5% Flavobacterium, в 1,5% Providencia, в 1,4% B. Сereus.
Анализ проведенных исследований относительно антибиотикорезистентности грамположительных бактерий выявил следующее. Они проявили высокую чувствительность к цефалоспоринам 2 -3 поколений: цефаклору, цефотаксиму и цефтриаксону (92-100%). Доминирующая часть выделенных бактерий проявила чувствительность к азитромицину, меропенему и нитрофурантоину, пиперациллин-тазобактаму, рифампину и триметаприм – сульфометаксазолу (90-95%).

Грамположительная флора проявила одинаковое отношение, как в плане чувствительности, так и резистентности относительно хлорамфеникола, гентамицина, ванкомицина (40-60%). Установлена резистентность грамположительных бактерий оксациллину, имипенему, эритромицину, амоксиклав/клавуланату, цефазо-лину, пенициллину, азтреонаму, а также к ампициллину (от 72 до88%).
Грамнегативная флора проявила наибольшую чувствительность к амикацину, ципрофлоксацину, имипенему и пиперациллин-тазобактаму (70-78,6%). Грамотрицательные бактерии заняли срединное положение в отношении чувствительности к цефалоспоринам 1,3,4 поколений (цефазолину, цефотаксиму, цефтазидиму, цефтриаксону, цефокситину), амоксиклав/клавуланату, ампициллину, ампициллин/сульбактаму, гентамицину, гати- и левофлоксацинам, пиперациллину, тикарциллин/клавуланату, а также к триметаприм-сульфометаксозолу (от 46 до 63 %). 
Полученные результаты подчеркивают значимость проведения исследований по клиническим показаниям, направленным на расшифровку этио-логии внутрибольничных инфекций и определения тактики лечения.

Изучение структуры возбудителей инфекций различных локализаций с внедрением современной технологии позволило расширить спектр определяемых микроорганизмов, сократить время диагностики, обеспечить более точную расшифровку. Результаты антибиотикорезистентности, в свою очередь, несомненно, окажут существенную роль в оказании своевременной целенаправленной этиотропной терапии.

Современные технологии  в клинической микробиологии

Литература:

1. Решедько Г.К., Рябкова Е.Л., Фарещук А.Н., Страчунский Л.С. Неферментирующие грамотрицательные возбудители нозокомиальных инфекций в ОРИТ России: проблемы антибиотикорезистентности. Клиническая антимикробная химиотерапия, 2006,т 8, №3,17
2. Баранова А.А., Страчунский Л.С. Применение антибиотиков у детей в амбулаторной практике. Методические рекомендации. Клиническая антимикробная химиотерапия, 2007,том 9, №3, 200-210.
3. Антибактериальная терапия. Практическое руководство под редакцией Л.С.Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова. Москва, 2000,190 с
4. Андреева И.А. Изучение антибиотикорезистентности микроорганизмов с использованием компьютерной программы WHONET. Проблемы медицинской микологии, 2013,т 15, №2. 54.
5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: 14th informational supplement. NCCLS document M 100-S, 14.2004. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, PA