+7 (727) 250 00 11
+7 (776) 250 05 58

ISSN 2225-806X

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Автор: К.И. Билялова, ж.С. Темирбаева, а.Ж. Аринова
Место работы: Научный центр педиатрии и детской хирургии Министерства здравоохранения и социального развития Республики Казахстан, Казахстан, Алматы.

Аннотация 

Приведены результаты по исследованию этиологической структуры различных биотопов с применением современной технологии (микробиологический анализатор Walk awаy 40 США , представлены данные по антибиотикорезистентности грам(+) и грам(-) бактерий с использованием программы WHONET. Установлен микробиологический спектр представителей различных микроорганизмов. Определены ведущие антибактериальные препараты в лечении нозокомиальных инфекций.

Ключевые слова: этиологическая структура, микроорганизмы, нозокомиальные инфекции, антибиотикорезистентность.

Введение

За последнее время диапазон микроорганизмов, вызывающих внутрибольничные инфекции значительно изменился [1-3]. В настоящее время среди возбудителей тяжелых инфекций в отделениях реанимации и интенсивной терапии преобладают грамположительные микроорганизмы. В начале 80-х годов прошлого века в этиологии инфекций на их долю приходилось около 40% случаев заболеваний, спустя 10 лет — свыше 50%. Изменение структуры актуальных возбудителей тяжелых инфекций, безусловно связано с применением антибактериальных средств, активных в отношении как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий с формированием устойчивых штаммов и их распространенности. Несмотря на изменения в составе возбудителей внутрибольничных инфекций, лаборатория должна быть в состоянии идентифицировать большую часть микроорганизмов, вызывающих вспышки эндемических внутрибольничных инфекций. Длительность процесса верификации возбудителя, отсутствие лабораторий во многих стационарах, приводит к загруженности централизованных лабораторий и увеличению сроков выдачи результатов. В настоящее время в республике нет собственных производителей бактериальных диагностикумов. Препараты, ввозимые извне, не сертифицированы, отсутствуют антибактериальные диски на используемые в стране препараты. Все, о чем говорилось выше, снижает качество и уровень микробиологических исследований. Важность роли лаборатории заключается в точной идентификации микроорганизма с установлением его родового и видового наименования с определением антибиотикорезистентности [4]. В каждом конкретном стационаре структура нозокомиальных инфекций зависит от профиля стационара, политики применения антибактериальных препаратов, контингента пациентов[5].

Таким образом, целью данного исследования явиляется оптимизация исследования этиологического спектра различных клинических материалов с использованием современной программы мониторинга антибиотикорезистентности WHONET.

Материал и методы

В данной работе представлен материал по обследованию различных локусов детей. Посев и идентификация проводилась на соответствующих дифференциально-диагностических средах по общепринятой методике. Распределение внутрибольничных штаммов и определение антибиотикорезистентности изолированных микроорганизмов осуществлялось компьютерной программой WHONET. С целью ускорения процессов идентификации до родового и видового состава выделенных микроорганизмов, а также определения антибиотикорезистентности в работе использовался микробиологический анализатор «Walk away 40», США. 

Результаты

Анализ полученных данных показал, что микробный пейзаж различных локусов детей представлен многообразием условно-патогенных микроорганизмов. В настоящее время установлена роль многих из них в развитии различных патологий у человека. 

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

 Среди изолированных микроорганизмов большую часть составили грамположительные микроорганизмы (рис.1). Из них доля стрептококков группы В составила 90,5 % , незначительный процент по высеваемости заняли стрептококки группы А, группы Д, группы С и пневмококки (соответственно 5,3%, 2,3%, 1,1% и 0,8%) (рис .2).

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Что же касается спектра энтерококков, то нами установлен процент выделения Str. faecalis 80%, Str. faecium 20% (рис.3).

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Известен факт наличия у стрептококков природной устойчивости ко многим антибиотикам, широко используемым в стационарах. По данным различных стран, БГСА являются не самыми частыми возбудителями внутрибольничных инфекций, однако могут быть причиной продолжительных и трудно поддающихся контролю вспышек, являются возбудителями инфекций родильниц и новорожденных, характеризующихся тяжестью клинического течения, высокой летальностью, трудностью диагностики. Наиболее выделяемым видом по частоте из общего числа стафилококков (рис.4) у детей оказался S.haemolyticus -43,5%. Вторым по частоте определен коагулазоотрицательный стафилококк S.epidermidis -34,7%,обладающий выраженной устойчивостью к антибиотикам, способностью удерживаться и размножаться на сосудистых катетерах и других медицинских устройствах. Один из ведущих возбудителей ВБИ — S. aureus изолирован у детей в 18,9%. Незначительный процент среди выделенных стафилококков заняли S. intermedius, S.saprophyticus, S. hominis- hominis и прочие виды (соответственно 1,8%, 0,7%,0,2%). В контроле обсемененности различными видами стафилококков важную роль играет эффективная система эпидемиологического наблюдения, позволяющая установить появление метициллинрезистентных стафилококков (MRSA) в стационаре, с которыми связывают вспышки внутрибольничных инфекций.

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Наряду с грамположительными микроорганизмами, от больных детей нами изолированы грамотрицательные бактерии (рис.5).

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

В одинаковом соотношении выделены E.coli и Klebsiellae spp.(15,5%) . Klebsiellae pneumonia составили 46,4 %. В 18,9% определены Enterobacter spp. Бактерии рода Serattia spp. обнаружены в 1,8%, Citrobacter spp в 1,0%, Cedecae в 0,8% и бактерии рода Proteus spp. в 0,5%. Энтеробактерии занимают второе место после грамположительных бактерий возбудителей внутрибольничных бактериемий у взрослых. У новорожденных бактериемии также вызываются грамотрицательными бактериями. Около 50% возбудителей инфекций мочевыводящих путей относятся к энтеробактериям. Энтеробактерии могут контаминировать медицинские инструменты и растворы, используемые до, после и во время хирургического вмешательства и явиться факторами передачи инфекций в стационаре.  

Остальные представители условно-патогенных бактерий (рис.6) из различных локусов детей нами выделены в следующем виде: в 46,0% Ps.aeruginosae,в 39,6% H.influenzae, в 7% Acinetobacter, в 4,5% Flavobacterium, в 1,5% Providencae u в 1,4% B. cereus

СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КЛИНИЧЕСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

Анализ проведенных исследований относительно антибиотикорезистентности грам (+) бактерий выявил следующее. Они проявили высокую чувствительность к цефалоспоринам 2 -3 поколения: цефаклору, цефотаксиму и цефтриаксону (92-100 %). Доминирующая часть выделенных бактерий проявила чувствительность к азитромицину, меропенему и нитрофурантоину, пиперациллин-тазобактаму рифампину и триметаприм –сульфометаксазолу (90-95%). 

Грам (+) флора проявила одинаковое отношение, как в плане чувствительности, так и резистентности относительно хлорамфеникола, гентамицина, ванкомицина (40-60%). Установлена резистентность грам(+) бактерий оксациллину,имипенему, эритромицину, амоксиклав/клавуланату, цефазолину, пенициллину, азтреонаму, а также к ампициллину(от 72 до88%) 

Грам (-) флора проявила наибольшую чувствительность к амикацину,ципрофлоксацину,имипенему и пиперациллин-тазобактаму(70-78,6%). Грам (-) флора заняла срединное положение в отношении чувствительности к цефалоспоринам 1,3,4 поколений (цефазолину, цефотаксиму, цефтазидиму, цефтриаксону, цефокситину), амоксиклав/клаву-ланату, ампициллину, ампициллин/сульбактаму, гентамицину, гати- и левофлоксацинам, пиперациллину, тикарциллин/клавуланату, а также к триметаприм-сульфометаксозолу (от 46 до 63 %). 

Для правильной трактовки результатов бактериологического исследования необходимо помнить, что: пенициллиназопродуцирующие стафилококки (устойчивые к безилпенициллину) резистентны к аминопенициллинам, карбоксипенициллинам, уреидопенициллинам.

Стафилококки, устойчивые к метициллину и оксациллину, резистентны ко всем бета-лактамным антибиотикам (включая цефалоспорины) и, как правило, устойчивы к аминогликозидам: возможно клиническое применение гликопептидов.

В случае устойчивости стафилококков к любому из аминогликозидов, назначать эти препараты нецелесообразно, так как быстро развивается устойчивость ко всем антибиотикам этой группы.

Грамотрицательные бактерии имеют частично перекрестную устойчивость к аминогликозидам – возбудители, устойчивые к аминогликозидам первого поколения, чувствительны к гентамицину, устойчивые к гентамицину чувствительны к аминогликозидам третьего поколения, но не наоборот.

Список литературы:

1. Решедько Г.К., Рябкова Е.Л., Фарещук А.Н., Страчунский Л.С. Неферментирующие грамотрицательные возбудители нозокомиальных инфекций в ОРИТ России: проблемы антибиотикорезистентности. Клиническая антимикробная химиотерапия, — 2006, — т. 8, — № 3, — 17 с.

2. Баранова А. А., Страчунский Л.С. Применение антибиотиков у детей в амбулаторной практике. Методические рекомендации. Клиническая антимикробная химиотерапия, — 2007, — т. 9, — №3, — 200-210 с.

3. Антибактериальная терапия. Практическое руководство под редакцией Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова С.Н. – М., — 2000, 190 с. 

4. Андреева И.А. Изучение антибиотикорезистентности микроорганизмов с использованием компьютерной программы WHONET. Проблемы медицинской микологии, — 2013, — т. 15, — 254 с.

5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: 14th informational supplement. NCCLS document M 100-S, 14.2004. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, PA.(in Russ)

References

1. Reshed’ko G.K., Ryabkova Ye.L., Fareshchuk A.N., Strachunskiy L.S. Nefermentiruyushchiye gramotritsatel’nyye vozbuditeli nozokomial’nykh infektsiy v ORIT Rossii: problemy antibiotikorezistentnosti. Klinicheskaya antimikrobnaya khimioterapiya, — 2006, — t. 8 — № 3, — 17 s.

2. Baranova A. A., Strachunskiy L.S. Primeneniye antibiotikov u detey v ambulatornoy praktike. Metodicheskiye rekomendatsii. Klinicheskaya antimikrobnaya khimioterapiya, — 2007, — t. 9 — №3, — 200-210 s.

3. Antibakterial’naya terapiya. Prakticheskoye rukovodstvo pod redaktsiyey Strachunskogo L.S., Belousova YU.B., Kozlova S.N. — M., — 2000, 190 s.

4. Andreyeva I.A. Izucheniye antibiotikorezistentnosti mikroorganizmov s ispol’zovaniyem komp’yuternoy programmy WHONET . Problemy meditsinskoy mikologii , — 2013 , — t . 15, — 254 s.5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: 14th informational supplement. NCCLS document M 100-S, 14.2004. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, PA. (in Russ)

ТҮЙІНДЕМЕ 

Клиникалық микробиологиядағы заманауи технологиядар

К.И. Билялова, Ж.С. Темирбаева, А.Ж Аринова 

Педиатрия және балалар хирургиясының ғылыми орталығы Д және ӘҚМ ҚР, 

Казакстан, Алматы

Заманауи технологиясын қолданылуымен әр түрлі биотоптың этиологиялық құрылымының зерттелінген нәтижелері ұсынылган (Walk awey 40 АҚШ микробиологиялық анализаторы, WHONET бағдарламасының  игерудегі грам (+) және грам (-) бактериялардың антибиотикақтұрақтылық  нәтижелері келтірілген). Әртүрлі микроорганизмнің өкілінің микробиологиялық спектрі тағайындалды. Нозокомиальды инфекциясын емдеуде басты  антибактериальды препараттар анықталды. 

Түйін сөздер: этиологиялық құрылым, микроорганизмдер, нозокомиальды инфекциялар, антибиотикатұрақтылық. 

Summary              

Innovative technologies in clinical Microbiology

K.I. Bilyalova, A.J.Arinova, J.S.Temirbaeva Scientific

Center of Pediatrics and Pediatric Surgery ministry of public welfare and health protection of  Republic of  Kazakhstan,

Kazakhstan, Almaty

 The results of  study, aimed to reveal etiological structure of  the    different locus   using the modern equipment (microbiological analyzer “Walk away 40”, U.S.А.) shows the efficiency of  the WHONET program.  Our investigation presents the wide spectrum of gram-negative and gram-positive  microorganisms, that was impossible using the routine methods. This program helps to determine the   antibacterial drugs with the maximal activity in the treatment of nosocomial infections.


Keywords: etiological structure, microorganisms, nosocomial infections, antimicrobial resistance.