Е.Ж. Бекмухамбетов, А.А. Мамырбаев
Западно-Казахстанский государственный медицинский университет имени Марата Оспанова,
Казахстан, Актобе
Т.К. Кудайбергенов, Ж.А. Утешева, Л.С. Дзоз, Н.В. Кравцова,
Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии,
Казахстан, Алматы
Аннотация
Целью исследования явилось изучение иммунно-гормональных параметров в крови здоровых беременных в III триместре, рожениц и родильниц. Методом прямой мембранной иммунофлюоресценции на проточном цитометре BD Facs Calibur изучено содержание и функциональные свойства в периферической крови СД3+, СД4+ СД8+, СД16+, СД19+, СД25+, СД56+, HLA-DR+ с использованием коммерческих наборов реагентов, меченных FITS BD Biosciences (США). Изучение содержания гормонов и плацентарного фактора роста (тиреотропного гормона – ТТГ, эстрадиола – Е2, прогестерона – ПГ, дегидроэпиандростерона – ДГЭАС, хорионического гонадотропина – ХГ, плацентарного фактора роста – ПФР) проводилось хеми-люминисцентным методом на автоматическом анализаторе «Cobas е411» (Roche- Hitachi).
Результатом проведенного исследования явилась разработка нормативных показателей иммунного и гормонального профилей в периферической крови у женщин в III триместре физиологической беременности, у здоровых рожениц и родильниц.
При исследовании были установлены особенности белок- и гормонобразующей функции в третьем триместре у здоровых беременных города Алматы, которые выражались в изменении показателей в сыворотке крови, относительно нормативных пределов, рекомендуемых для использования производителями диагностических наборов.
Несмотря на то, что основные исследуемые параметры входят в нормативные пределы, отмечались изменения в синтезе стероидов: увеличение содержания дегидроэпиандростерона сульфата, снижение эстрадиола, прогестерона в сыворотке крови беременных по сравнению со средними значениями по данным литературы. Увеличение содержания хорионического гонадотропина в крови беременных указывает на усиление проницаемости плаценты.
Ключевые слова: физиологическая беременность, роженицы, родильницы, периферическая кровь, субпопуляционный состав лимфоцитов, гормоны.
Регуляция гестационного процесса включает формирование функциональной системы мать-плацента-плод, адаптацию иммунной и гормональной систем к беременности [1, 2]. После установки иммунологического симбиоза между матерью и плодом, система становится исключительно устойчивой к неблагоприятным воздействиям. Гормональные и другие события, запрограммированные на конец беременности, приводят к разрыву иммунологического симбиоза [3, 4, 5].
Своеобразие взаимоотношений организмов матери и плода диктует необходимость проведения исследований у беременных, в родах и в послеродовом периоде. Немаловажное значение при этом имеют исследования на системном уровне (периферическая кровь).
Целью исследования явилось изучение иммунно-гормональных параметров в крови здоровых беременных в III триместре, рожениц и родильниц.
Материал и методы
Исследования проведены у 30 здоровых женщин фертильного возраста с физиологически протекающей беременностью при сроке беременности 38-41 неделя (III триместр), в группе 30 здоровых рожениц, и у 30 здоровых родильниц. Материалом исследования служила периферическая кровь женщин. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов выявляли по общелимфоцитарному гейту СД45+ методом прямой мембранной иммунофлюоресценции на проточном цитометре BD Facs Calibur с применением панели моноклональных антител к поверхностным антигенам лимфоцитов: к СД3+ — маркеру зрелых Т-лимфоцитов, к СД3+,СД4+ — маркеру хелперно-индукторных Т-клеток, к СД3+, СД8+- маркеру супрессорно-цитотоксических Т-лимфоцитов, к СД3+, СД16+, и к СД3+, СД56+ — маркеру натуральных киллерных клеток СД16+ и СД56+ фенотипов, к СД19+ — маркеру В-лимфоцитов, к СД3+, HLA-DR+ — маркеру активированных Т-лимфоцитов, к СД3+, СД25+ — маркеру £-цепи ИЛ-2, к СД3+, СД95+ — маркеру апоптоза. Определяли ИРИ по соотношению СД4+/СД8+ клеток, а также индекс апоптоза по СД95+/СД25+. Локализацию активационных маркеров СД25+ и СД95+ на клетках осуществляли методом двойного фенотипирования. Использовали коммерческие наборы реагентов, меченные FITS (CД3, CД4, CД8, CД16, CД19, СД25, СД95, HLA-DR), а также меченные РЕ (СД25, СД95) BD Biosciences (США).
Изучение содержания гормонов и плацентарного фактора роста (тиреотропного гормона – ТТГ, эстрадиола – Е2, прогестерона – ПГ, дегидроэпиандростерона – ДГЭАС, хорионического гонадотропина – ХГ, плацентарного фактора роста – ПФР) проводилось хеми-люминисцентным методом на автоматическом анализаторе «Cobas е411» (Roche- Hitachi).
Результаты исследования
В результате исследования были получены следующие данные. В таблице 1 приведены основные показатели субпопуляционного состава лимфоцитов в периферической крови здоровых беременных III триместра, здоровых рожениц, здоровых родильниц.
Было выявлено следующее. Содержание абсолютного количества лимфоцитов в периферической крови родильниц было достоверно больше, нежели в группе рожениц и родильниц (р<0,05). Количество СД3+ Т-лимфоцитов нарастало в группе рожениц и родильниц в сравнении с группой беременных III триместра (% и абс. значение, р<0,05). Иммунорегуляторные СД3+, СД4+ хелперно-индукторные Т-клетки также были увеличены в группе родильниц (% и абс. значение) по сравнению с группой беременных III триместра и рожениц (р<0,05). Цитотоксические СД3+, СД8+ лимфоциты были в группе родильниц больше, нежели в других сравниваемых группах (абс. значение, р<0,05).
Натуральные киллерные клетки СД16+ фенотипа были увеличены в группе рожениц и родильниц в сравнении с беременными III триместра как в %, так и в абсолютном значениях, а СД56+ фенотипа увеличены в группе рожениц в сравнении с беременными III триместра (%) и далее снижались в группе родильниц (% и абс. значение). Количество В-лимфоцитов достоверно снижалось в группе родильниц в сравнении с аналогичными данными, полученными в группе беременных III триместра и рожениц (% и абс. значение).
Активированные по HLA-DR+ антигену Т-клетки имели повышенный уровень в группе рожениц (%) в сравнении с беременными III триместра и далее снижались в группе родильниц в сравнении с данными, выявленными в группе рожениц (%, р<0,05). По маркеру ранней активации СД25+ изменения касались только группы родильниц, где количество клеток было достоверно меньше, нежели у беременных III триместра и группы рожениц (%, р<0,05). В абсолютных цифрах эти изменения не обнаружены.
По маркеру поздней активации клеток СД95+ в группе рожениц уровень клеток был достоверно выше, нежели в группе беременных III триместра, а затем снижался в группе родильниц (% и абс. значение, р<0,05).
ИРИ-во всех группах женщин был в пределах одинаковых значений. Индекс апоптоза, указывающий на готовность клеток к гибели, был выше в группе рожениц по сравнению с данными, полученными в группе беременных III триместра (%), и достоверно снижен в группе родильниц (% и абс. значение, р<0,05).
Таким образом, исследования фенотипического профиля лимфоцитов периферической крови здоровых беременных III триместра, рожениц и здоровых родильниц выявило некоторые изменения в содержании тех или иных субпопуляций клеток, обусловленных различными периодами нормальной беременности, которые можно рассматривать как нормативные в группе беременных III триместра, в группе рожениц, родильниц.
Изучение локализации активационных маркеров СД25+, СД95+ на СД4+, СД8+, СД16+ клетках позволило выявить увеличение локализации СД25+ маркера на СД8+ в группе рожениц и родильниц в сравнении с беременными III триместра (таблица 2), что указывает на усиление функциональной активности этих клеток в группах рожениц и родильниц. Локализация СД25+ на СД4+ лимфоцитах во всех группах женщин была одинаковой. То есть, иммунорегуляторные клетки были функционально активны только в отношении супрессорно-цитоксических СД8+ лимфоцитов в родах у рожениц и после родов у родильниц.
Локализация активационного маркера СД25+ на СД16+ клетках была несколько увеличенной только в группе рожениц в сравнении с беременными III триместра (р<0,05), указывая на усиление функциональной активности натуральных киллеров СД16+ фенотипа. Маркер поздней активации клеток СД95+ практически был одинаковым во всех исследуемых группах женщин на СД4+ лимфоцитах, увеличен в группе рожениц в сравнении с данными, полученными в группе беременных III триместра и родильниц на СД8+ лимфоцитах и снижен на СД16+ клетках в группе родильниц в сравнении с данными, полученными у беременных III триместра и рожениц (р<0.05). То есть, число СД8+ клеток, готовых к апоптозу, было увеличено у женщин в родах и снижено на натуральных киллерных клетках СД16+ фенотипа после их окончания (в группе родильниц).
Полученные данные означают, что функции клеток, определяемые по маркерам ранней СД25+ и поздней СД95+ активации на клетках меняются. Зависит это от различных периодов беременности, где каждая субпопуляция лимфоцитов выполняет определенную роль. Полученные данные можно рассматривать как нормативные.
Таким образом, исследование количества и функциональных свойств лимфоцитов периферической крови здоровых беременных III триместра, здоровых рожениц и родильниц определило нормативные показатели фенотипа лимфоцитов, их функциональных свойств, которые могут рассматриваться в качестве контроля.
Также было определено состояние гормонального статуса у здоровых беременных в третьем триместре, рожениц и родильниц при физиологической беременности.
Стероидные гормоны и специфические протеины играют огромную роль для развития беременности. Их содержание отражает функциональное состояние плода и плаценты, может быть использовано в качестве показателя функции фетоплацентарного комплекса. Основной задачей данного раздела было изучение состояния гормонов и белков «зоны беременности» в крови здоровых беременных, родильниц и рожениц.
Результаты исследования стероидогенеза и белков беременности при физиологической беременности у беременных контрольной группы представлены в таблице 3. Группу исследования составили 30 беременных в 3-м триместре, наблюдавшихся в научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии. В качестве группы сравнения представлены показатели стероидных гормонов по данным литературы (Зайцев С.В., Яковлева Э.Б., Арбузова С.Б., Сорокатая Э.В., 2005), которые согласуются с показателями, рекомендуемыми производителями используемых лабораторией наборов.
Согласно полученным данным, содержание стероидных гормонов у исследованных беременных входит в нормативные пределы, рекомендуемые производителями диагностических наборов по всем показателям. Но средние значения оказались значительно смещены в ту или иную сторону. Так полученные при исследовании показатели содержания Е2 и ПГ были ниже относительно медианы по данным литературы на 12,1% и 29% соответственно. Содержание же ДГЭАС существенно превышало средние показатели и составило 55,7%.
Среднее содержание плацентарного фактора роста в исследуемой группе было почти в 2 раза меньше среднего показателя. Смещение средних показателей ХГ (60,5%) было более выраженным.
Таким образом, в результате исследований нами выявлены существенные изменения в показателях стероидного профиля в крови беременных исследуемой группы относительно данных литературы. Обращает внимание снижение уровня эстрогенов (эстрадиола). Отмеченное повышение уровня прогестерона может рассматриваться как компенсаторное для увеличения синтеза тиреоидных гормонов и повышения основного обмена.
Исследования стероидных гормонов и белков беременности были проведены также у 30 рожениц в первом периоде родов и на 4 сутки в послеродовом периоде. Результаты исследований представлены в таблице 4.
Как видно из данных таблицы, уровни содержания гормонов у рожениц и после родов подвержены большим колебаниям. Однако просматривается естественная тенденция падения всех гормональных показателей и факторов роста после родов. Определенное снижение количества прогестерона, дегидроэпиандростерона сульфата и хорионического гонадотропина относительно показателей при 37-38 неделях беременности отмечалось уже в первый период родов. Резкий пик повышения содержания был выявлен только у эстрадиола, концентрация которого в крови родильниц увеличивалась почти в 5 раз.
Было проведено исследование содержания тиреотропного гормона у здоровых беременных, рожениц и родильниц. Результаты проведенного исследования представлены в таблицах 5 и 6.
При сравнительном анализе результатов исследования содержания тиреотропного гормона в исследуемой группе в III триместре беременности с данными литературы были получены следующие данные (таблица 5).
Согласно данным проведенного исследования, содержание тиреотропного гормона у беременных контрольной группы, соответствует нормативным пределам, рекомендуемым для использования производителями диагностических наборов. Количество ТТГ у беременных группы исследования было выше медианы группы сравнения на 32,5% (р<0,01). Также необходимо отметить, что уровень тиреотропного гормона не изменялся существенно в процессе родов и в послеродовом периоде (нет достоверных различий), и зависел в большей степени от состояния функции щитовидной железы у женщины до и после беременности.
Выводы
Результатом проведенного исследования явилась разработка нормативных показателей иммунного и гормонального профилей в III триместре физиологической беременности в крови беременных, рожениц, родильниц. При исследовании были установлены особенности белок- и гормонобразующей функции в третьем триместре у здоровых беременных города Алматы, которые выражались в изменении показателей в сыворотке крови, относительно нормативных пределов, рекомендуемых для использования производителями диагностических наборов. Несмотря на то, что основные исследуемые параметры входят в нормативные пределы, отмечались изменения в синтезе стероидов: увеличение содержания дегидроэпиандростерона сульфата, снижение эстрадиола, прогестерона в сыворотке крови беременных по сравнению со средними значениями по данным литературы. Увеличение содержания хорионического гонадотропина в крови беременных указывает на усиление проницаемости плаценты.
Список литературы:
1. Болтовская М.Н., Маршицкая М.Н., Назимова С.В. Анализ результатов клинического использования ПАМГ-теста у беременных группы риска. «Акушерство и гинекология» — М., — 1999.- № 6.- С. 11-13.
2. Новиков П.Д., Новиков Д.К. Сравнительная характеристика современных методов иммунофенотипирования лимфоцитов.- Иммунопатология. Аллергология. Инфектология. – М., — 2000. – №1. – С. 62-66.
3. Абрамченко В.В., Данилова Н.Р., Костюшов Е.В. Теория гипокальциурии и оксидативного стресса в возникновении гестоза и его профилактики препаратами кальция.- Проблемы репродукции. – 2002. – № 4. – С. 13–15.
4. Культербаева М.А. Центральная и регионарная гемодинамика у беременных с гестозом: автореф. … к.м.н: 14.00.01. – М., — 2001. – 25 с.
5. Шмагель К.В., Черешнев В.А. Иммунитет беременной жен¬щины. – М.: — 2003. – 226 с.
References
1. Boltovskaya M.N., Marshitskaya M.N., Nazimova S.V. Analiz rezul’tatov klinicheskogo ispol’zovaniya PAMG-testa u beremennykh gruppy riska. «Akusherstvo i ginekologiya» — M., — 1999.- № 6.- S. 11-13.
2. Novikov P.D., Novikov D.K. Sravnitel’naya kharakteristika sovremennykh metodov immunofenotipirovaniya limfotsitov.- Immunopatologiya. Allergologiya. Infektologiya. — M., — 2000. — №1. — S. 62-66.
3. Abramchenko V.V., Danilova N.R., Kostyushov Ye.V. Teoriya gipokal’tsiurii i oksidativnogo stressa v vozniknovenii gestoza i yego profilaktiki preparatami kal’tsiya.- Problemy reproduktsii. — 2002. — №
4. — S. 13-15.4. Kul’terbayeva M.A. Tsentral’naya i regionarnaya gemodinamika u beremennykh s gestozom : avtoref . … K.m.n : 14.00.01 . — M., — 2001. — 25 s.
5. Shmagel’ K.V., Chereshnev V.A. Immunitet beremennoy zhen¬shchiny . — M .: — 2003. — 226 s.
ТҮЙІНДЕМЕ
Физиологиялық жүктілік кезінде әйелдерде репродуктивтік процесстердің иммундық-гормоналдық параметрлері
Е.Ж. Бекмухамбетов, А.А. Мамырбаев
Марат Оспанов атындағы Батыс-Қазақстан мемлекеттік медицина университеті.
Қазақстан, Ақтөбе
Т.К. Құдайбергенов, Ж.А. Утешева, Л.С. Дзоз, Н.В. Кравцова
Акушерлік, гинекология және перинатология ғылыми Орталығы,
Қазақстан, Алматы
Физиологиялық жүктіліктің ІІІ — триместріндегі әйелдердің, дені сау босанатын және босанған әйелдердің перифериялық қанында иммундық және гормоналдық профильдердің нормативтік көрсеткіштері ұсынылған. Перифериялық қан лимфоциттерінің функционалдық сипатын және фенотопикалық профилін зерттеу клеткалардың сол немесе басқа субпопуляциясының құрамында бірнеше кемістіктерді айқындауға мүмкіндік берді, сонымен қатар қалыпты жүктіліктің әртүрлі кезеңдерімен байланысты олардың фунцияларының өзгерістерін.
Зерттеу барысында, Алмты қаласының дені сау жүкті әйелдерінде үшінші триместрде белок – және гормон құру функцияларының ерекшеліктері айқындалды, олар қан сарысуындағы көрсеткіштердің өзгеруінде көрсетілді.
Түйін сөздер: физиологиялық жүктілік, босанатын, босанған, перифериялық қан, лимфоциттердің субпопуляциялық құрамы, гормондар.
Summary
Immuno-hormonal mechanisms parameters of reproductive processes in women with physiological pregnancy
E.Zh. Bekmukhambetov, A.A. Mamyrbayev
West-Kazakhstan State Medical University named after Marat Ospanov,
Kazakhstan, Aktobe
Kudaibergenov T.K., Utesheva Zh.A., L.S. Dzoz, N.V. Kravtsova
Scientific Center of Obstetrics, Gynecology and Perinatology,
Kazakhstan, Almaty
The article presents the regulatory immune and hormonal profiles in healthy women peripheral blood in the normal pregnancy III trimester, during parturition and postpartum.
Study of lymphocytes phenotypic profile and functional properties in peripheral blood revealed some variation in the content of various cells subpopulations, as well as changes in their functions, which have been associated with different periods of physiological pregnancy.
Research of protein-installed features and hormone-formation functions in the third trimester in healthy pregnant women from Almaty, which were reflected in a serum indicators changes, recommended for use by diagnostic kits manufacturers.
Keywords: physiological pregnancy, parturition, postpartum, peripheral blood lymphocyte subpopulation composition, hormones.
Отправить рукопись