+7 (727) 250 00 11
+7 (776) 250 05 58

ISSN 2303-9949

Опыт изучения микробиоценоза влагалищного биотопа беременных г. Алматы

Автор: М.А. Баймуратова, З.С. Абдусаламова
Место работы: Алматинский государственный институт усовершенствования врачей

РЕЗЮМЕ

Проводилось микробиологическое исследование беременных женщин репродуктивного возраста, в частности, микологическое исследование. Целью работы являлось совершенствование идентификации штаммов грибов рода Candida spp. в микробиоценозе влагалищного биотопа. Установлена доминирующая роль C.albicans 85,3% случаев вагинальных кандидозов. Предлагается одномоментое использование трех сред выделения: хромогенной среды с ФД 192, среда Никерсона, среда Сабуро с хлорамфениколом, позволяющих на этапах учета первичного посева получить информацию о наличии грибов, степени обсемененности, сокращая время на верификацию до вида основных возбудителей из числа грибов.

ТҰЖЫРЫМ

Репродуктивті жастағы әйелдерге микробиологиялық соның ішіндегі микологиялық зертеулер жүргізілді. Қынап битоптарының микрофлорасының саурауқұлақтарының анықтау әдістерін Candida spp. Қынып кандидозы C. albicans 85,3% басымдылығы анықталды. Бірден үш қоректі ортаны өолдану ұсынылды; хромогенді орта ФД 192 (Үнді),  Никерсон ортасы (Үнді), Сабуро ортасы хлоромфениколға (Үнді) осы ортаталардыңқысым артықшылығы зерттеу материалдарының саңрауқұлақтармен ластану дәрежесін анықтауға мүмкіндік берді, уақты қысқартып түрге дейін анықтайды.

SummarY

Was conducted the microbiological examination of pregnant women of reproductive age, including the mycological research. The aim of the investigation was to elaborate the identification of strains of the fungi of the sort Candida ssp. in a microbiocenosis of vaginal biotope. Found the dominant role with Albicans 85,3% in cases of vaginal candidiasis. Proposed the simultaneous usage of three area of discharging the chromogenic habitat with FD 192(India), Nickerson’s area (India), Saburo’s area with chloramphenicol (India), allowing to get information about the presence of fungi in the primary stages of seeding, the degree of semination, reducing the time for the verification before the main type of infectious matter of fungal pathogens.

Актуальность

Дрожжевые грибы рода Сandida spp. широко распространены в природе и относятся к уникальным микроорганизмам, демонстрирующим широкий диапазон адаптивных возможностей [1]. В различных экологических нишах организма человека грибы могут быть как уверенными комменсалами, так и успешными оппортунистами [2,3]. К числу важнейших медико-социальных проблем относится инфекционная патология репродуктивной системы женщины, в частности, в структуре которой грибковые поражения играют достаточно существенную роль. Сведения о распространенности вагинального кандидоза достаточно скудны, так как в большинстве случаев заболевание не выделяется из прочих дисбиотических процессов, часто регистрируемых во влагалищном биотопе сексуально активных женщин. Согласно кооптированным данным [4], частота выделения грибов в популяции женщин групп повышенного риска увеличилась с 3-4% в 60-70-е годы прошлого до 17-20% в начале XXI века. Результат взаимного влияния возбудителей на практике трудно предсказуем, ведь в большинстве случаев клиническая картина искажается, в итоге затрудняется лабораторная диагностика и выбор адекватной терапии. К сожалению, на сегодня не разработаны четкие рекомендации, которые бы позволили оценить роль изолируемых клинических изолятов грибов рода Candida spp., выделенных из вагинального содержимого, при этом эпизоды колонизации слизистых грибами практически здоровых людей требуют дифференциации бактерионосительства от этиопатогена.

Целью исследования явилось совершенствование идентификации штаммов грибов рода Candida spp. в микробиоценозе влагалищного биотопа беременных женщин г. Алматы.

Материалы и методы

Для микробиологического исследования нами были отобраны беременные женщины в возрасте от 19 до 40 лет без клинических признаков кандидоза. Всего обследовано 55 образцов (мазки из цервикального канала) от больных, находящихся на амбулаторном наблюдении в поликлиниках г. Алматы. Бактериологическое и микологическое исследование мазков со слизистой влагалища проводилось согласно существующих НД [5]. Микроскопию нативного материала проводили 5-ю красителями (пикриновая кислота, лактофенол, лактофенол хлопковый голубой, лактофенол пикриновый, муциркарминовый краситель по Мейеру), количественно определяли уровень обсемененности грибами клинического образца, ростовые свойства изучали на питательных средах (ПС), а также регистрировали биологические особенности с определением таксономической единицы (до вида) дрожжеподобных грибов рода Candida spp. гинекологических штаммов. В работе для культивирования были использованы следующие питательные среды:

  • Хромогенный агар для грибов Candida, модифицированный HiCrome Candida Agar Modified M1456 + добавка для быстрого и прямого обнаружения Candida spp. в смешанной культуре HiСrome Candida selective supplement ФД 192 (п-во Индия);
  • Висмут-сульфит-глюкозо-глицино-дрожжевой агар среда Никерсона Bi.G.G.Y Agar (Nickerson Medium) М217 (п-во Индия);
  • Агар Сабуро с глюкозой и хлорамфениколом Sabouraud Chloramphenicol (п-во M1067 Индия) – общностью данных ПС по рецептуре является основа агара для дерматофитов Dermatophyte Test Agar Base М188 (п-во Индия);
  • Основа хромогенного агара для дрожжевых и плесневых грибов HiCrome OGYE Agar Base M1467 + селективная добавка с окситетрациклином Oxytetra Selective Supplement ФД 032 (п-во Индия).

Результаты и обсуждение

Проанализированы 345 нативных образцов клинического материала. Осмотр проводился изначально в различных полях зрения: в 10 полях зрения, 2 полях зрения и 1 поле зрения путем микроскопирования. По результатам проведенных нами микроскопических исследований получены данные, позволившие сделать некоторые практические выводы. Критерий оценки эффективности микроскопии нативного мазка, в отношении обследуемого клинического материала осуществлялся одномоментно в трех: 1, 2, 10 полях зрения, с регистрацией в рабочих журналах. Результаты по изученным образцам были представлены в следующем соответствии: поля зрения к полученным положительным результатам просмотра, в частности, гинекологические мазки учитывались так: в 1 (поле зрения) – 48 клеток (количество положительных находок), соответственно в 2-х полях – 53, 10 полях – 48. Выявлено, что наибольшую ценность представляет осмотр нативного мазка в одном и двух полях зрения – гинекологические штаммы 61,6% и 69% соответственно. По результатам выполнения микроскопии 345 образцов, нами выведен способ оценки уровня обсемененности грибами, как информативный критерий. Практически полновесной находкой, на наш взгляд, являлась систематизация по результатам микроскопии в вопросе выбора ПС в отношении потенциально ожидаемых грибов и бактерий. Полученные сведения оказались достоверным ориентиром для перспективности проведения дальнейшего этапа идентификации, что позволило оптимизировать временные затраты для ранней диагностики грибковой причастности. Между тем, адекватность оценки обнаружения этиологических агентов, должна не исключать высокой вероятности микологической причастности, особенно у лиц с хронической формой течения болезни. Поэтому дальнейшие результаты культивирования in vitro предполагали подбор ПС выделения по результатам MS.

Как известно, питательные среды имеют исключительное значение в микробиологии. Следовательно, искусственное культивирование дрожжеподобных грибов рода Candida spp., несомненно, является одним из основополагающих этапов, заслуживающих дополнительного анализа в выборе наиболее оптимальных ПС. Правильный подбор среды обеспечивает возможность выделения грибов, получения чистых культур, изучения их морфологических и физиологических особенностей, идентификации, способствует быстрой и правильной диагностике инфекционных заболеваний. Физиология микроорганизмов, в частности, грибов, крайне многообразна, следовательно, также многообразны и их специфические потребности в питательных веществах. Анализ полученных результатов контроля качества ПС с клиническими штаммами, выделенными из репродуктивного тракта,  ориентировали на целесообразность применения только 3-х ПС: среды Сабуро с глюкозой и хлорамфениколом (М1067) (Индия), хромогенной среды (М1456) + добавка для быстрого и прямого обнаружения (Candida spp.) в смешанных культурах FD 192 (Индия), среды Никерсона (М217) (Индия). Они, безусловно, близки по составу и имеют одно предназначение – широкое использование для выделения и выращивания возбудителей микозов человека. По итогам оценки ростовых свойств установлено, что на хромогенном агаре + ФД 192 (Индия) зарегистрирован рост единичных клеток штаммов C.krusei, C.glabrata; на среде Никерсона (Индия) обнаруживался также рост единичных клеток – C.glabrata, C.albicans, C.krusei; на Сабуро (Индия) – отмечался рост единичных клеток C.glabrata, C.albicans, что свидетельствовало о хороших ростовых свойствах на элективных и селективных ПС. Временные затраты на культивирование (24-48 ч) рaзнятся с преимуществом хромогенной среды и Никерсона, над средой Сабуро, где классически рост отмечается через 5 дней (120 часа).

Нами проанализированы выделенные 61 клинических штамма, выделенные из репродуктивного тракта, включая грибы. В лидерах оказались дрожжеподобные грибы рода Candida, изолированные в монокультуре C.albicans в 85,3% случаях. Другие не албикансные виды составляли 4,9% случаев. Частота выделения грибов Candida spp. в ассоциации с представителями условно-патогенной флоры (УПФ) 9,8% случаев, из них были обнаружены ассоциации грибов вида C.albicans с: S.saprophiticus, S.еpidermidis, а также обнаружен тройной микст C.albicans + E.coli + C. freundi. Ассоциативные Candida sрp., стимулируя рост других УПМ, способны обусловить их ведущую роль не только в возникновении воспаления, но и развитии дисбиозов, при этом препятствуя лечебному эффекту пробиотиков.

Таким образом, установлено, что одномоментое использование трех сред выделения: хромогенной среды с ФД 192, среда Никерсона, среда Сабуро с хлорамфениколом позволяют на ранних этапах получить информацию о наличии грибов, степени обсемененности, сокращая время на верификацию до вида основных возбудителей из числа грибов.

Суммируя полученные нами сведения о распространенности вагинального кандидоза среди обследованных беременных, установлена доминирующая роль C.albicans. Однако, остается не решенной проблемой наличие нормативного документа в РК, обуслoвливающего использование современных питательных сред выделения, а также использования единого алгоритма выделения и идентификации дрожжеподобных грибов Candida spр. из клинических биосубстратов для стандартизации проводимых клинико-микробиологических исследований.

Литература:

  1. Короткова Т.Н. Диагностика и лечение локального и генерализованного кандидоза: Автореф. дисс. канд мед. наук. Чебоксары, 2006, 17 с.
  2. Зеленова Е.Г., Заславская М.И., Махрова Т.В. Кандиды: экология, морфофункциональные особенности и факторы патогенности // Нижегородский медицинский журнал. 2002, № 1, с. 73-83.
  3.  Карпунина Т.И., Олина А.А., Машуров М.Г. и др. Фосфолипаза оппортунистических грибов: их возможная роль в патогенезе и диагностике микозов //Ж. Проблемы медицинской микологии. 2006, Т.8, №4, с. 41-46.
  4. Анкирская А.С., Муравьева В.В. и др. Генитальный кандидоз в структуре оппортунистических инфекций влагалища. Принципы лабораторной диагностики и значение мониторинга чувствительности грибов к антимикотикам// Акушерство и гинекология, 2009, №5, с. 31-36.

Приказ МЗ СССР №535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» от 22.04.1985.