+7 (727) 250 00 11
+7 (776) 250 05 58

ISSN 2225-806X

Микробиоценоз полости рта у лиц со съемными пластиночными протезами

Автор: В. А. Чесноков, А. А. Стафеев, М. Г. Чеснокова
Место работы: ГБОУ ВПО Омской государственной медицинской академии, г. Омск (Россия)

Резюме
Цель – изучить особенности микробиоценоза полости рта и зубных протезов при ортопедической реабилитации сьемными акриловыми пластиночными протезами, изготовленными методом горячей полимеризации. Обследован 21 пациент возраста от 45-80 лет, выделены 2 группы обследования (1-ая группа – лица, не использовавшие ранее съемные протезы, 2-ую группу составили лица, пришедшие на повторное протезирование). Для микробиологического исследования проводили забор биоматериала с поверхности слизистой оболочки полости рта, а также с поверхности акриловых съемных зубных протезов. Изучение микробиоты со слизистой оболочки полости рта лиц, ранее не носивших протезы, показало выявление разнообразного спектра факультативно-анаэробных, аэробных и анаэробных представителей в различных концентрациях. В наибольшей концентрации присутствовали Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis), Staphylococcus saprophyticus (S. saprophyticus), Acinetobacter calcoaceticus (A. сalcoaceticus), Streptococcus oralis (S. oralis), Enterococcus faecalis (E. faecalis), Clostridium spp., Corynebacterium spp. Отмечается выявление Сandida albicans со слизистой оболочки полости рта у лиц обоих групп, также с поверхности съемных протезов.

Summary
The goal of the article is to study features of mouth microbiocenosis and dentures with orthopedic rehabilitation, removable acrylic laminar dentures fabricated by hot polymerization. The study included 21 patients between the ages of 45-80 years, the survey has identified 2 groups (1st group – persons not previously used removable dentures, the second group consisted of persons who came to the re-replacement). For microbiological studies were carried out sampling of biological material from the surface of the oral mucosa, as well as from the surface of acrylic removable dentures. The study of the microbiota with the mucous membranes of the mouth of persons not previously worn dentures showed revealing a diverse range of facultative anaerobic, aerobic and anaerobic representatives at various concentrations. At the highest concentration present Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis), Staphylococcus saprophyticus (S. saprophyticus), Acinetobacter calcoaceticus (A. salcoaceticus), Streptococcus oralis (S. oralis), Enterococcus faecalis (E. faecalis), Clostridium spp., Corynebacterium spp . Candida albicans is marked with the identification of the oral mucosa in patients of both groups, as with surface dentures.

Ключевые слова: микробиоценоз, съемные протезы, микробиота, микобиота, слизистая оболочка полости рта. 
Keywords: microbiocenosis, dentures, microbiota, mycobiota, the mucous membrane of the mouth.

Актуальность
Литературные данные свидетельствуют о необходимости учитывать характер взаимодействия материалов для протезирования с микроорганизмами полости рта [1,2,3,4]. Колонизация бактерий на поверхности зубопротезных материалов приводит к формированию биопленки, жизнедеятельность микробиоты способствует разрушению пластмасс, образованию токсических для организма человека продуктов при деструкции стоматологических материалов [5,6,7,8]. Существенным условием усиления микробной колонизации и развития инвазии в ткани является способность микробиоты прикрепляться к поверхности зубов, слизистой оболочки и имеющихся протезов [9,10,11]. В связи с этим для нас представляло интерес изучение представителей микробиоценоза полости рта при проведении ортопедической реабилитации пациентов полными и частичными съемными акриловыми протезами, изготовленными методом горячей полимеризации.
Цель – изучить особенности микробиоценоза полости рта и зубных протезов при ортопедической реабилитации съемными акриловыми пластиночными протезами, изготовленными методом горячей полимеризации.

Материалы и методы
Обследован 21 пациент возраста 45-80 лет. Выделены 2 группы обследования, в 1-ю группу вошли пациенты, не использовавшие ранее съемные протезы, во 2-ю группу – пациенты, пришедшие на повторное протезирование в связи с истечением сроков использования протезов. У 5 пациентов отмечали полную адентию полости рта, у 16 пациентов зарегистрирована частичная адентия (в 11 случаях на нижней челюсти, в 5 случаях на верхней челюсти). Для микробиологического исследования проводили забор биоматериала при помощи стерильного тупсера с поверхности акриловых полных и частичных съемных зубных протезов – до протезирования и в период адаптации при использовании протезов, а также с поверхности слизистой оболочки полости рта. Готовили серию двукратных разведений исходного материала 103 -1012 для посева микроорганизмов на соответствующие питательные среды для получения роста микро- и микобиоты. Для выявления стрептококков использовали для посева 5% кровяной агар с азидом натрия и 5% кровяной гемин-агар, для выявления стафилококков – желточно-солевой агар, для обнаружения энтерококков использовали энтерококковый агар, для определения представителей рода Hamophylus, Neisseria применяли шоколадный агар с линкомицином; среда Блаурокка использовалась для выделения бифидобактерий, среда Эндо для выделения энтеробактерий. Для выявления лактобактерий использовали лактобакагар. Культивирование проводили при температуре 37 0С. После термостатирования осуществляли количественный подсчет колоний каждого вида с учетом посевной дозы и степени разведения биосубстрата. Видовую идентификацию выделенных чистых культур осуществляли на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств в соответствии с определителем Берджи (Дж. Хоулт, 1997). Биохимическую идентификацию чистых культур микроорганизмов проводили с помощью тест-систем фирмы АРI (Франция) и Roche (Германия). Дрожжеподобные грибы рода Candida выделяли на среде Сабуро, для селективной изоляции Candida использовали среду Candi Select 4 (BioRad, Франция), обеспечивающую помимо изоляции прямую идентификацию видов дрожжеподобных грибов. В ряде случаев для проведения идентификации грибов рода Candida использовали колориметрический тест Auxacolor 2 (BioRad, Франция), основанный на утилизации сахаров. После термостатирования осуществляли количественный подсчет колоний каждого вида с учетом посевной дозы и степени разведения биосубстрата. Количественное содержание микробиоты выражали через десятичный логарифм величины выросших колоний (lg КОЕ/мл). Биометрический анализ проводили с использованием пакетов STATISTICA-6, БИОСТАТИСТИКА, возможностей программы Microsoft Excel.

Результаты исследований
Установлен разнообразный спектр представителей микробиоты. Доминировали факультативно-анаэробные виды, относящиеся к родам Staphylococcus (вид S. aureus), Enterococcus (вид E. faecalis), Clostridium, Klebsiella. Изучение микробиоты со слизистой оболочки полости рта лиц, ранее не носивших протезы, показало выявление 19 видов представителей факультативно-анаэробных, аэробных и анаэробных микроорганизмов в различных концентрациях. В наибольшей концентрации присутствовали Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis), Staphylococcus saprophyticus (S. saprophyticus), Acinetobacter calcoaceticus (A. сalcoaceticus), Streptococcus oralis (S. oralis), Enterococcus faecalis (E. faecalis), Clostridium spp., Corynebacterium spp. 
Микробиологический анализ биоматериала пациентов, ранее носивших протезы, показал отсутствие S. saprophyticus и Bifidobacterium spp., достаточно высокую концентрацию Сlostridium spp., дрожжеподобных грибов рода Candida, S. aureus, S. haemolyticus, E. faecalis, Kl. pneumoniaе (Рис.1). 
(По оси Х — представители микро- и микобиоты, выделенные из биоматериала обследованных; по оси Y — концентрация микроорганизмов, десятичный логарифм величины выросших колоний (lg КОЕ/мл).
Для нас представляло интерес микробиологическое изучение биоматериала поверхности протезов у обследованных лиц. Наиболее часто высевали Micrococcus spp. в 40,0% случаев в концентрации 3,0±1,24 М±m lg КОЕ/мл, Staphylococcus aureus в 50,0% случаев (содержание 2,8±0.95 М±m lg КОЕ/мл), S.haemolyticus в 30,0 % случаев в концентрации 2,4±1,22 М±m lg КОЕ/мл. 
На рис. 2. показано высокое содержание микрококков, стафилококков и энтерококков при колонизации протезного материала.

Микробиоценоз полости рта у лиц со съемными пластиночными протезами

(По оси Х — выделение представителей микробиоты биоматериала; по оси Y — концентрация микробиоты, десятичный логарифм величины выросших колоний (lg КОЕ/мл).
Анализ грамотрицательной микробиоты биоматериала поверхности протезов обследованных лиц показал преимущественное выделение культур Kl. pneumoniae в 40,0 % случаев при содержании 2,8±1,2 КОЕ/мл, Ps. aeruginosa в 20,0 % случаев при содержании 1,20±0,80 КОЕ/мл. Установлено, что из 5 видов выделенных грамотрицательных микроорганизмов в наиболее высокой концентрации присутствовал вид Кl.pneumoniae. 
Микологический посев биоматериала пациентов со среды Сабуро позволил выделить дрожжеподобные грибы вида Сandida albicans (С. albicans) (рис. 3). Микобиота присутствовала на слизистой оболочки полости рта у обследованных 1-ой группы в 28,6% случаев, на слизистой оболочки полости рта у обследованных 2-ой группы в 42,85% случаев, с поверхности протезов у обследованных 2-ой группы в 50,0% случаев. На рис. 3 показано наиболее высокое содержание С. albicans в биоматериале, полученном от лиц, раннее носивших протезы. Наиболее высокую концентрацию отмечают при колонизации протезов в сравнении со слизистой оболочкой полости рта обследованных.

(По оси Х — выделение С. albicans 1 с поверхности протезов, со слизистой оболочки пациентов 2-ой группы С. albicans 2, со слизистой оболочки пациентов 1-ой группы С. albicans 3; по оси Y — концентрация дрожжеподобных грибов, десятичный логарифм величины выросших колоний (lg КОЕ/мл)).
Результаты бактериологической идентификации анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов в микробиоте биоматериала с поверхности протезов показывают высокий уровень выделения анаэробных микроорганизмов рода Clostridium spp. из биоматериала обеих групп обследования лиц, соответственно, в 71,4% и 76,6% случаев, при более значительном содержании у лиц 2 группы (4,94±0,75) lg КОЕ/мл. Лактобактерии у лиц 2 группы исчезали, их выявляли лишь в 5,9% случаев, в 1-ой группе обследованных лиц их частота выделения была 28,6% случаев. Бифидобактерии выделяли только в материале, полученном от лиц 1-ой группы обследования в 14,3% случаев при низком количественном содержании (0,57±0,39) lg КОЕ/мл.

Выводы
1. Установлены особенности состава микробиоты различного биоматериала полости рта в обследованных группах. Изучение микробиоты со слизистой оболочки полости рта лиц, ранее не носивших протезы, в наибольшей концентрации присутствовали S. epidermidis, S. saprophyticus, A. сalcoaceticus, S. oralis, E. faecalis, Clostridium spp., Corynebacterium spp. 
2. Микробиологический анализ биоматериала пациентов, ранее носивших протезы, показал отсутствие S. saprophyticus и Bifidobacterium spp., достаточно высокую концентрацию Сlostridium spp., дрожжеподобных грибов рода Candida, S. aureus, S. haemolyticus, E. faecalis, Kl. pneumoniaе.
3. Микробиологическое изучение биоматериала с поверхности протезов лиц показало наиболее часто высеваемые виды грамположительной микробиоты, колонизирующей протезную поверхность – Micrococcus spp., Staphylococcus aureus, S. haemolyticus, E. faecalis. 

Микробиоценоз полости рта у лиц со съемными пластиночными протезами

4. Анализ грамотрицательной микробиоты биоматериала поверхности протезов пациентов показал преимущественное выделение культур Kl. pneumoniae, Ps .aeruginosa, в наиболее высокой концентрации присутствовал вид Кl. pneumoniae. 
5. Отмечается выявление микобиоты (Сandida albicans) со слизистой полости рта у лиц обоих групп, также с поверхности съемных протезов. Наиболее высокая концентрация С. albicans установлена при колонизации съемных протезов.
Результаты проведенных микробиологических исследований свидетельствуют о выраженной колонизации протезов ассоциантами микробиоты – биодеструкторами, что может оказывать неблагоприятное воздействие на состояние полости рта.
Образование глубоких дефектов, пор в пластмассе пластиночных протезов в результате взаимодействия с микроорганизмами-биодеструкторами приводит к формированию очагов персистенции микрофлоры в виде биопленки внутри материала, являясь причиной дисбиоза в ротовой полости.

Литература:

1. Автандилов Г.А. Ультраструктурное исследование процесса взаимодействия Staphylococcus aureus с полиуретаном // Dental forum. 2011. №3. с. 11-12.
2. Зайченко О.В. Оценка колонизации акриловых пластмасс, используемых при зубном протезировании условно-патогенными микроорганизмами в эксперименте in vitro // Российский стоматологический журнал. 2005. №3. с. 19-21.
3. Маренкова М.Л.: Особенности ортопедического лечения пациентов с явлениями непереносимости зубных протезов на фоне микробного дисбаланса полости рта Дис..к.м.н./ Центральный научно-исследовательский институт стоматологии. 2007. 143с. 
4. Нидзельский М.Я. Особенности изменений химического состава воздушной среды ротовой полости при разных сроках пользования зубными протезами, изготовленными из акриловых пластмасс // Современная стоматология. 2011 №5. с. 119. 
5. Нидзельский М.Я. Повышение прочностных характеристик акриловых пластмасс для базисов съемных протезов с помощью электромагнитной технологии // Современная стоматология. 2012. №2.с. 99-101.
6. Огородников М.Ю. Клинико-микробиологическая характеристика динамики микробной колонизации съемных зубных протезов с базисами из полиуретана и акриловых пластмасс //Российский стоматологический журнал. 2007. №6. с. 20-22.
7. Рыжова И.П. Современные технологии в протезировании съемными протезами// Современная ортопедическая стоматология. 2006. №6. с. 34.
8. Савкина Н.И. Клинико-микробиологическое обоснование выбора материала зубочелюстного протеза: Дис. к.м.н./ Центральный научно-исследовательский институт стоматологии. 2004. 141 с. 
9. Сравнительный анализ адгезии микробной флоры рта к базисным материалам челюстных протезов на основе полиуретана и акриловых пластмасс // Российский стоматологический журнал. 2011. №1. с. 19-23.
10. Bassi M. Scanning electron microscopy: a new technique in the study of the microbiology of works of art // Int. Biodeterior. Biodegrad. 2001. 41:85-92.
11. Biodegradation of acrylic based resins // Dental Materials. 2010. 26. 5. 171-180.