Аннотация
Описан многолетний опыт использования определения С-реактивного белка при лечении больных с воспалительной реакцией в условиях детского стационара и инфекционной больницы. Описана сравнительная характеристика методов определения С-реактивного белка и прокальцитонина.
Ключевые слова: С-реактивный белок, прокальцитонин, ИФА, турбидиметрия, иммунохимический метод
Введение
Исследование С-реактивного белка рассматривается как достоверный тест воспаления при бактериальных заболеваниях. Общеизвестно, что С-реактивный белок является белком острой фазы и содержится в крови здоровых людей в минимальных количествах, которые можно уловить только высоко чувствительными методами. Содержание С-реактивного белка увеличивается в сыворотке крови при воспалении (инфекционных заболеваниях), некрозе, травме. С-реактивный белок – это α-2-глобулин, синтезируется гепатоцитами в ответ на секрецию клетками рыхлой соединительной ткани первичных медиаторов воспаления. Основная функция С-реактивного белка состоит в активации иммунных реакций организма, в том числе фагоцитоза. Он участвует во взаимодействии Т- и В-лимфоцитов, активирует систему комплемента по классическому типу. Уровень С-реактивного белка в сыворотке крови повышается через 3 – 6 часов воспаления (до начала увеличения количества гранулоцитов) и удваивается примерно каждые 8 часов; в итоге уровень С-реактивного белка при воспалении может превышать верхнюю границу нормы, характерную для здоровых людей, в десятки, сотни и тысячи раз. В целом, чем выше уровень С-реактивного белка в крови, тем выше вероятность наличия у больного повреждения тканей, воспалительного, инфекционного или онкологического заболевания. При успешном выздоровлении его уровень быстро снижается. С уровнем С-реактивного белка в сыворотке крови коррелируют показатели СОЭ, лейкоцитоз и нейтрофилез, но уровень С-реактивного белка растет и снижается быстрее.
Функциональной особенностью С-реактивного белка является очень широкий диапазон концентраций при воспалении. Уровень С-реактивного белка при вирусной и спирохетной инфекции возрастает незначительно, поэтому его высокие значения в сыворотке крови при отсутствии травмы указывают на наличие бактериальной инфекции. Согласно данным литературы, определение уровня С-реактивного белка в сыворотке крови используют при инфекционной патологии с целью диагностики инфекции и оценки тяжести воспаления у новорожденных, в том числе при сепсисе; дифференцирования бактериального и вирусного менингита у детей; бактериальных осложнений при хирургических вмешательствах. Диагностика инфекционных заболеваний и контроль эффективности антибактериальной терапии составляют основную цель диагностического применения С-реактивного белка.
Прокальцитонин – гликопротеин, предшественник кальцитонина. В норме их синтез осуществляется в С-клетках щитовидной железы. У здоровых людей концентрация прокальцитонина низкая, его референсная величина в плазме крови составляет менее 0,05 нг/мл. Увеличение уровня прокальцитонина в крови происходит при невирусных инфекциях. Значительное повышение прокальцитонина обнаруживают у пациентов с бактериальным сепсисом. При генерализации бактериальной инфекции происходит активная выработка прокальцитонина в нейроэндокринных клетках легких, в поджелудочной железе, печени, макрофагах, моноцитах и других тканях. Уровень прокальцитонина в сыворотке крови возрастает в течение 3 – 12 часов после генерализации инфекции. Уровень прокальцитонина четко коррелирует с тяжестью воспалительного процесса. По литературным данным при уровне прокальцитонина более 2 нг/мл существует высокий риск тяжелого сепсиса. В клинической практике исследование прокальцитонина стали все чаще использовать для диагностики сепсиса, синдрома полиорганной недостаточности и септического шока. Это обусловлено тем, что динамика изменений уровня прокальцитонина в крови при этих состояниях значительно отличается от других маркеров воспалительного процесса, в том числе и С-реактивного белка, так как выделение прокальцитонина избирательно индуцируется при бактериальной инфекции. Секреция прокальцитонина вообще не увеличивается при вирусных инфекциях, аутоиммунных процессах, неоплазиях и операционной травме. В связи с этим определение прокальцитонина рекомендовано использовать для дифференциации бактериального и небактериального воспалительного процесса. Большим достоинством определения уровня прокальцитонина в крови по сравнению с С-реактивным белком является то, что он повышается довольно быстро после возникновения инфекции и не подвержен значительным колебаниям в течение дня.
Целью настоящей работы является определение диагностической ценности методов количественного определения С-реактивного белка и прокальцитонина крови при обследовании больных стационара с различными воспалительными заболеваниями.
Материалы и методы
Мы использовали автоматизированный метод иммунотурбидиметрии с использованием реактивов BioSystems. С-реактивный белок сыворотки вызывает агглютинацию частиц латекса, покрытых антителами к человеческому С-реактивному белку. Агглютинация латексных частиц пропорциональна концентрации С-реактивного белка и измеряется турбидиметрически с использованием светофильтра на 536 нм Этот метод позволяет определить уровень С-реактивного белка в интервале от 0,001 до 0,005 г/л и выше. Было сделано 419 определений С-реактивного белка в Областной детской клинической больнице и 188 анализов в инфекционном стационаре. У всех обследованных имело место наличие воспалительного процесса, так как отмечался лейкоцитоз со сдвигом лейкоцитарной формулы влево, ускоренное СОЭ и клинические проявления болезни. Результаты анализов показали нормальное или незначительное повышение концентрации С-реактивного белка у больных с ОРВИ и десятикратное и более чем стократное увеличение уровня С-реактивного белка у больных с бактериальными формами воспаления. Таких результатов было всего 242 из 419 анализов в детском стационаре и 104 из 188 анализов в инфекционном стационаре.
Для количественного определения уровня прокальцитонина применялся набор реагентов «Прокальцитонин-ИФА-Бест». Набор предназначен для количественного определения концентрации прокальцитонина в сыворотке крови человека методом твердофазного ИФА. Метод определения основан на «сэндвич»-варианте ИФА. Специфическими реагентами набора являются моноклональные антитела к прокальцитонину, сорбированные на поверхности лунок разборного полистерольного планшета; поликлональные антитела к прокальцитонину человека с биотином.
На первой стадии анализа исследуемые и контрольные образцы инкубируют в лунках с иммобилизованными антителами. Имеющийся в образцах прокальцитонин связывается с иммобилизованными антителами. Затем, связавшийся прокальцитонин взаимодействует при инкубации с конъюгатом №1 (биотин). На третьей стадии связавшийся конъюгат №1 взаимодействует при инкубации с конъюгатом №2 (стрептовидин с пероксидазой хрена). Количество связавшегося конъюгата №2 определяют цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы хрена-перекиси водорода и хромогена – тетраметилбензидина. Интенсивность желтого окрашивания пропорциональна концентрации прокальцитонина в образце. После измерения оптической плотности раствора в лунках рассчитывается концентрация прокальцитонина в анализируемых образцах.
Таблица 1 — Результаты обследования больных ОДКБ и ШГИБ на С-реактивный белок и прокальцитонин в 2014-2015гг.
Выводы
Клинико-диагностическая значимость определения С-реактивного белка и прокальцитонина в педиатрической и инфекционной практике очень велика, а в сравнении между собой эти тесты почти равны. Однако, учитывая более высокую стоимость реактивов для разового определения прокальцитонина иммунохимическим методом и невозможность срочной постановки ИФА, представляется экономически более целесообразным использовать в лечебно-диагностическом процессе определение С-реактивного белка. Вместе с тем, необходимо развивать использование определения прокальцитонина путем централизации исследования в крупных лабораториях города.
References
1. Titov V.N., Bleznyukov O.P. S — reaktivnyy belok : fiziko — khimicheskiye svoystva , metody opredeleniya i diagnosticheskoye znacheniye , Klinicheskaya laboratornaya diagnostika . — M., — №4, — 2004.
2. Titov V.N. , Ekzogennyye i endogennyye patologicheskiye faktory ( patogenny ) kak prichina vospaleniya . Klinicheskaya laboratornaya diagnostika . — . M, — №5, — 2004.
3. Titov V.N. , Diagnosticheskoye znacheniye povysheniya urovnya S — reaktivnogo belka v « klinicheskom » i « subklinicheskom » intervalakh , Klinicheskaya laboratornaya diagnostika . — M., — №6, — 2004.
4. Kon’kov A.V., Popovich S.Ye. , Diagnosticheskoye znacheniye prokal’tsitonina , S — reaktivnogo belka i transrezonansnoy funktsional’noy topografii v techenii vnebol’nichnoy pnevmonii . Praktikuyushchemu vrachu . Saratovskiy nauchno — meditsinskiy zhurnal . — Saratov, — №3, — 2008.
5. Kishkun A.A. Rukovodstvo po laboratornym metodam diagnostiki . — M., -2013.
Түйіндеме
Балалар стационарында және жұқпалы ауруханасында қабыну реакциясы бар науқастарды емдеуде С-реактивті белокты анықтаудағы көп жылдық тәжірибені қолдану
К.М. Алибаева, Н.А. Бердиярова, Н.К. Мухамеджанова
Облыстық балалар клиникалық ауруханасы,
Шымкент қалалық жұқпалы аурулар ауруханасы
Kazakhstan, Шымкент
Бұл мағлұматта балалар стационары мен инфекция аруханасында қабыну ауруларына С-реактив белогын анықтауда көп жылдар бойы қолданады. С-реактив белогы және прокальцитониннің салыстырмалы сипаттамасы жазылған.
Түйін сөздер: С-реактивті белогі, прокальцитонин, ИФА, турбидиметрия, иммунохимиялық әдіс.
Summary
The quantitative determination of C-reactive protein and PROCALCITONIN in the Laboratories of regional Children’s Hospital and Shymkent city infectious hospital SKR
K.M. Alibayeva, N.A. Berdiyarova, N.K. Mukhamedzhanova
Regional Children’s HospitalInfectious
Diseases Hospital
Kazakhstan, Shymkent
The paper describes experience in C-reactive protein determination during inflammatory reaction treatment on children day-and-night clinic and infectious hospital basis. Comparative characteristics of C-reactive protein and procalcitonin determination methods described below.
Keywords: C-reactive protein, procalcitonin, elisa, turbidimetry, metod of immunochemistry
Отправить рукопись