Изучение роли УПМ в этиологической структуре заболеваний дыхательной системы

РЕЗЮМЕ

В настоящем сообщении представлены данные обследования образцов от больных воспалительной патологией дыхательной системы. Целью исследования являлось совершенствование идентификации штаммов условно патогенных микроорганизмов, выделенных из клинического образца пациентов с патологией органов дыхания. Установлено, что видовой состав микрофлоры респираторного тракта был представлен в доминанте дрожжеподобных грибов С.аlbicans – 93,5%, наряду с которыми клинический интерес представляли в 35,5% случаев  обнаружения дрожжеподобных грибов рода Candidа spp. и кокковых грамположительных бактерий.

Тұжырым

Аталған жұмыстағы тыныс жолдарының қабыну процестері бар науқастар зерттелген. Жұмыс мақсаттында тыныс ағзаларының патологиясында бөлініп алынған шарты патогенді саңрауқұлақтарды идентификациялау. Респираторлы трактың микрофлорасында бөлінген саңрауқұлақтардың ішіндегі C.albicans 93,5% басымдылығын көрсетеді сонымен қаттар ашытқы тәрізді саңрауқұлақтар мен грамоң коккты флора 35,5% бөлінгені  клиникалық маңызды көрсеткіш болып табылды.

SummarY

This report presents the data of examination samples from patients with inflammatory pathology of the respiratory system. The aim of the investigation was to elaborate the identification of strains of opportunistic pathogen isolated from clinical samples of patients with respiratory pathology. Found that the species composition of the microflora of the respiratory tract was presented in the dominant of yeast-like fungi C.albicans-93.5%, alongside which clinical interest represented in 35.5% of cases of the detection of yeast-like fungi of the sort Candida. spp. and coccal gram-positive bacteria

Актуальность

Согласно прогнозу ВОЗ, в текущем столетии будут доминировать инфекционные заболевания, в том числе, вызываемые условно-патогенной оппортунистической микрофлорой [1].Грибковые заболевания верхних дыхательных путей (ВДП) встречаются значительно чаще, чем диагностируются [2]. С современных позиций нормальная микрофлора – микробиота – рассматривается как качественное и количественное соотношение популяций  микробов отдельных органов и систем, поддерживающих биохимическое, метаболическое и иммунное равновесие организма хозяина, необходимое для сохранения  здоровья человека [3].

Целью настоящего исследования явилось совершенствование идентификации штаммов условно патогенных микроорганизмов, выделенных из клинического образца пациентов с патологией органов дыхания.

Материалы и методы

За период 2012-2013 гг. всего было обследовано 85 образцов от больных с клиническими диагнозами: острые респираторные вирусные инфекции, ангина, ларингит, пневмония. Обследование не ограничивалось стационаром и было расширено привлечением поликлиник г. Алматы – №4, №12, а также материалом пациентов из инфекционной больницы ГККП им. И. Жекеновой г. Алматы. Возраст пациентов варьировал в широком диапазоне от 17 до 74 лет. Распределение по полу пациентов, среди которых изолированы респираторные штаммы, показало, что женщины составляли 68,8%, а мужчины – 31,1%. Микробиологическое исследование предполагало изучение микробиоценоза информативного клинического материала по двум направлениям: бактериологическое, которое осуществлялось в соответствии с НД РК, а также использованием предпатентов, разработанных ППС кафедры; микологическое исследование проводилось согласно наработок российских исследователей (Меньшиков В.В., 2003) [4] и предпатентов (Кашуба Э.А., 2006) [5]. Для культивирования дрожжеподобных грибов использованы среды выделения, которые были отобраны по принципу селективного их начала. В частности, среда хромогенная с ФД 192 (Индия), среда Никерсона (Индия), а также Сабуро с хлорамфениколом (Индия). Метод посева и бактерий и грибов был выбран количественный, учет проводился согласно критериям этиологической значимости присутствия микробов в мокроте.

Результаты и обсуждение

Анализ видового состава микрофлоры респираторного тракта пациентов с клинически выявленным воспалительным процессом, показал, что штаммы грибов Candidа spp. в 64,5% случаев, по сравнению с этиологической структурой пневмотропных возбудителей и других бактерий, были представлены в доминанте вида С.аlbicans – 93,5%. При этом регистрировались и не албикансные виды грибов, представленные C.glablara – 4,5 %, C.tropicalis – 2%. Однако интерес представляло изучение, наряду с грибами, обнаруженных нами ассоциаций респираторных штаммов, т.е. бактериально-грибковых микстов с преимущественным участием условно-патогенных микроорганизмов. Среди них, лидирующее положение занимали грамположительные кокковые представители резидентной флоры респираторного тракта, составившие  в 67% случаев ассоциации с грибами. Незначительно, лишь в 6,7% обнаруживались ассоциации грамотрицательных микроорганизмов E.aerogenes, Е.cloacae в «дуэте» с С.аlbicans.

Для оптимизации идентификации грамположительных кокковых микроорганизмов нами был использован алгоритм идентификации, разработанный кафедрой гигиены, эпидемиологии и клинической микробиологии АГИУВ  (Предпатент  № 22776) [6]. В основе данного алгоритма был использован комплексный подход к этапам идентификации 15 родов, отнесенных по 9-му Определителю Берджи. В частности, путем изучения 11 фенотипических признаков исследуемой культуры микроорганизмов по «схеме-ключу», нам, за короткий период времени, предоставлялась возможность идентифицировать культуру. Основная роль отводилась на первом этапе определению способа дыхания клинических изолятов, а дальнейшая дифференциация между родами предполагала поэтапный учет: каталазной активности, гемолитической активности, способности образовывать пигмент, расти при 45^оС, резистентности к 10% NaCl, теста на ауксотрофность, морфологии, подвижности, наличия фермента фосфатазы, наличия газа при ферментации глюкозы. В итоге, практическому врачу вполне доступно по фенотипическим признакам осуществлять определение родовой принадлежности бактерий родов: Micrococcus, Staphylococcus, Stomatococcus, Streptococcus, Enterococcus, Gemella, Lactococcus, Leuconostoc, Deinococcus, Deinobacter, Peptococcus, Peptostreptococcus, Sarcina, Ruminococcus, Aerococcus посредством использования минимального количества тестов с ранжированием их в виде алгоритма, с последующим определением вида.

По полученным нами результатам выделения и идентификации респираторных бактерийных штаммов, имеющих высокую вирулентность, установлена их этиологическая причастность к воспалительному процессу, в частности: S. saprophyticus – 20%, S. epidermidis – 8,9%, E. faecalis – 4,4%, S. intermedius – 2,2%. Следует подчеркнуть, что доминанта сапрофитного стафилококка свидетельствует о возрастании роли коагулазоотрицательных стафилококков (КОС) инфекций дыхательной системы, о которых неоднократно сообщал целый ряд исследователей. Следует подчеркнуть, что эпидермальные и сапрофитные стафилококки выделялись в 10⁸-10⁹ КОЕ/мл, в 16,3% обнаруживались атипичные фенотипические признаки, в частности, морфология в нативном мазке, а затем и в «чистой» культуре этих видов микроорганизмов показывала не характерные мелкие кокки, расположенные в виде диплококков, коротких цепей, больше напоминающих энтерококки. Таким образом, использованный нами алгоритм идентификации родов грамположительных кокков (согласно предпатента № 22776) [6], позволил на 85% улучшить диагностику, сокращая временные затраты на упомянутом этапе исследования. Установлено, что условно-патогенные микроорганизмы в микробиоценозе клинического материала пациентов с заболеваниями дыхательной системы представлены в большинстве случаев С.аlbicans 93,5%, при этом выявлена активизация условно-патогенных кокковых культур в микстах с дрожжеподобными грибами С.аlbicans, способных утяжелить клиническое течение и полную элиминацию этиопатогена.

Литература:

1. Шкурупий В.А., Селятицкая В.Г. и др. Эффекты модифицированного амфотерацина в присистемном кандидозе в эксперименте. Общая патология и патологическая физиология. 2007, Том №43, №4, с. 367-369.

2. Профлорцентр РМАПО [Электронный ресурс] / Микотическая инфекция и антифунгальный иммунитет при оториноларингологической патологии / Арефьева Н.А. и др. Режим доступа: http:// — www.lorcentr.ru — Дата доступа: 05.01.2009; Vennewald I., Hencer M., Klemm E., Seebacher C. Fungal colonization of paranasal sinuses // Mycoses. 1999. №42, Suppl. 2, р. 33-36.

3. Бондаренко В.М., Воробьев А.А. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией. Журн. Микробиология. 2004. №1, с. 84-92.

4. Меньшиков В.В. Клиническая лабораторная аналитика. Том IY. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. М.: Агат Мед, 2003, 706 с.

5. Способ диагностики госпитальных штаммов. Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тюменская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения РФ // Предварительный патент на изобретение РФ №2004132996/15-G01N33/48. Кашуба Э.А., Тимохина Т.Х, Курлович Н.А. и др., 2006.

6. Способ идентификации грамположительных кокков // Предварительный патент на изобретение Республики Казахстан № 22776 Баймуратова М.А., Воронина В.Э., Крылова А.И. и др. // Бюллетень РК «Промышленная собственность». 2010 г., № 8, 45 с.